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細胞儲存10年、20年,長期低溫凍存複蘇後的活性如何?

健达国际再生医学中心
发表时间: 2024-04-18

在科學研究和實踐中,人們常常通過將細胞冷凍在-196℃的液氮裏,可以有效地減緩細胞活動和代謝速率,從而延長細胞的存活時間。



-196℃液氮爲生命按下暫停鍵




氮氣具備優秀冷卻劑的特質,它無色無味,性質非常不活潑,基本不會對被凍存物體的化學性質産生影響。

低溫之于細胞,可能是壹把雙刃劍。雖然-196℃能將其長期凍存,但想讓細胞安然橫跨200度的溫差可不是壹件簡單的事。

所以爲求壹個“剛剛好”,實驗室裏壹般都會采取梯度降溫法,如按照4℃、-20℃、 -80℃、-196℃(液氮)的順序逐級給細胞降溫,讓細胞有足夠的時間(部分實驗會讓細胞在-80℃維持1-2天再繼續降溫)去適應溫度,減少凍存過程對細胞造成的損傷。

自溫度降至-120℃開始,細胞內部便不會發生熱依賴性代謝過程了,當溫度來到-196℃,此時細胞內能極小,分子運動趨近于停止,就像細胞內的時間被按下了“暫停鍵”,生命活動也被凍結。所以,排除其他外部因素,在-196℃的環境裏,理論上細胞是可以實現“永生”的。



細胞長期凍存複蘇後的活性如何?


低溫凍存是個漫長的過程,細胞需扛住慢凍、速融裏壹波又壹波的“難關”,曆經千帆後,細胞能否保持高質量就成了最大的“謎”。下面我們來看看研究者的發現吧。

2018,國際期刊《Journal of Immunotherapy》上壹篇文章比較了短期凍存(<1年)及長期凍存(1-10年)下NK細胞的功能差異,結果發現凍存時間長短並不會影響NK細胞的擴增及抗腫瘤功能,它們在對抗乳腺癌細胞的表現上沒有差異。


長期凍存的NK細胞依舊能産生促炎細胞因子、幹擾素-γ 和腫瘤壞死因子-α,顯示出有效的抗腫瘤功能。

2009年,我國研究者探索低溫保存20年骨髓幹細胞後細胞活力影響,結果表明凍存20 年以上的幹細胞仍可維持其原有的體外增殖、分化、擴增和體內植入潛能。2011年,發表在blood雜志上的壹篇研究報告顯示,人體幹細胞冷凍23.5年後,活性依然很高。

細胞在經過長時間冷凍後再複蘇,仍具有正常的生物學活性,臍帶間充質幹細胞作爲細胞的壹種,也具有這種特性。爲此,研究者也對臍帶間充質幹細胞凍存後對幹細胞活力的影響進行了實驗。


案例1:11歲的湖南女孩曉穎2014年12月在湖南確診爲急性髓細胞白血病。爲更有效及時地進行治療,曉穎壹家聽取當地醫生建議,轉院到廣州南方醫院,希望能在南方醫院接受臍帶血造血幹細胞移植。當地臍血庫迅速爲其找到了壹份配型6/6相合的臍帶血,沒想到的是,植入自己體內的這份臍血是2000年在廣東省婦幼保健院采集的,凍存時間長達15年,按年齡來說,這份臍帶血居然還是她的“姐姐”。

這份臍帶血刷新了當地臍血庫凍存時間最長的臨床應用記錄,“臍血姐姐”雖沈睡了15年,但它依然生命力旺盛——移植前複蘇活性檢測高達94.2%。


案例2:2020年,壹枚27年前冷凍的胚胎被”喚醒“了,她被成功植入蒂娜·吉布森的子宮,並于當年12月順利出生,這位特殊的寶寶打破了當前已誕生的胚胎冷凍時間的最長紀錄(原爲24年)。

雖然莫莉·吉布森只有壹個多月大,但她其實能在過去 27 年裏的任何時候出生 。

以上所有案例說明,只要保護到位,複蘇得當,即使經曆了漫長的凍存,細胞也依舊能保持足夠的活性,依然能夠很好地適用于臨床。

總的來說,細胞之所以能夠凍存這麽久還具有良好的活性,是因爲細胞具有穩定的遺傳物質、自我修複和保護機制以及低溫凍存等因素的共同作用。這些保證了細胞能夠保存並傳遞重要的遺傳信息,維持生物體的生命活動。在凍存10年、20年、甚至上百年,待到需要時再次提取,真正能做到讓細胞“跨越時空”,爲人們帶去生的希望。



細胞儲存小貼士:

細胞技術的誕生堪稱是生物醫學發展史上重要裏程碑事件,被譽爲繼藥物和手術治療之後的第三次醫學革命。

人體免疫系統中的免疫力在20歲達到高峰,到了40歲時,就只剩20歲的壹半,到了70歲,只有20歲時的1/10,隨著年齡的增加,免疫系統衰退引起的免疫功能下降,容易引起各種疾病。

而幹細胞因具有修補、還原、替換和再生體內細胞的能力,對于壹些常規治療效果欠佳的疾病,包括心血管系統疾病、內分泌系統疾病、神經系統疾病、呼吸系統疾病、退行性疾病等難治性疾病,幹細胞療法表現出獨特優勢。

因此,爲了有效預防疾病,預先將當下健康年輕態的細胞,通過安全采集並超低溫凍存起來,在有抗衰防病之需時再回輸體內來對抗疾病、延緩衰老、增強抵抗力,就成爲了未雨綢缪的重要抉擇。

儲存自己健康時期的細胞,就如同儲蓄未來的生命與健康,爲自己和家人的幸福儲存壹份意義非凡的保障。

目前,細胞凍存技術,已是生物學保存物種的重要手段。應用面廣泛,無論是保存即將滅絕的動物、植被,還是精子、卵子凍存,都凸顯出了極大的優勢。


市面上除了儲存成人免疫細胞外,還有儲存的幹細胞類型:


1.臍帶/胎盤間充質幹細胞

新生兒降生之時,通過臍帶和胎盤采集獲得

優勢:臍帶/胎盤間充質幹細胞的儲存相當于變廢爲寶,具有汙染少、純度高、增殖能力強、免疫原性低等優點,可用于治療難治性疾病、抗衰老和美容等領域。

適用人群:新生兒


2.脂肪間充質幹細胞

從人體脂肪組織中獲得

優勢:脂肪組織可以分離出具有多向分化潛能和分泌細胞因子的脂肪間充質幹細胞,它可用來進行皮膚再生以及脂肪再生,還可以應用于疾病預防、抗衰老、保健等領域。

適用人群:18-60歲群體,尤其適合肥胖人士


3.牙髓間充質幹細胞

通過乳牙或智齒中獲得

優勢:牙髓間充質幹細胞具有較高的增殖能力、自我更新能力和多向分化潛能。尤其在牙周病治療、牙髓再生、牙齒修複重建等方面具有廣闊的研究和應用前景。

適用人群:6-11周歲乳牙脫落的兒童或有智齒的成人


4.子宮內膜間充質幹細胞

女性月經期,源于子宮內膜,通過經血排出體外

優勢:研究表明從女性宮血中提取的幹細胞,是壹種自我複制、定向分化能力強的幹細胞,可用于治療多種疑難性疾病,另外它還是美容抗衰的最佳細胞來源。

適用人群:經期女性


5.誘導多能幹細胞(iPS細胞)

通過自體幹細胞誘導、分化、基因編輯技術獲得

優勢:iPS細胞類似于胚胎幹細胞,是壹種具有超強分化能力的多能幹細胞,可無限擴增,並可以分化成所有細胞類型(如神經元、心髒、胰腺和肝細胞等),在臨床應用中可替換功能失調受損的組織及器官,以恢複其細胞功能,改變疾病與衰老狀態。


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